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上海恒遠分享整理：酶的細胞化學實驗技術過程

閱讀次數：1121 發(fā)布時間：2014/3/14 10:32:35

又是一個周五，時光飛逝，還記得上個星期的這個時候，我們?yōu)榕笥褌兎窒淼氖且粋€用TRIzol索取RNA的方法步驟。今天我們要給朋友們說的也是一個實驗過程，其相關于酶的細胞。下面我們就來看一看上海恒遠分享整理：酶的細胞化學實驗技術過程。

在一定條件下，使組織細胞內的酶與其底物相互作用，形成初級反應產物，再用捕捉劑在酶的作用部位進行捕捉，使其在顯微鏡下可見。

反應的過程如圖下所示：

我們通過圖中式可見，酶細胞化學反應實際上由兩項反應組成。前面的酶反應相當于細胞內自然條件下發(fā)生的酶促反應，后面的捕捉反應則是為了使酶反應可見而人為造成的。捕捉反應的目的是使酶反應產物形成在顯微鏡下可見的*終反應產物，即*終反應產物在光鏡下具有鮮明顏色，在電鏡下具有高電子密度。捕捉反應主要有金屬鹽沉淀法、色素形成和嗜鋨物質生成法。

在實驗中我們要準備好樣品的制備：

酶細胞化學的一個重要問題是既要保存好細胞內酶的活性，又要保存好細胞的結構，因此選擇適當的固定劑種類、濃度、固定的方式和時間是細胞化學技術的一個關鍵問題。光鏡樣品固定多選用中性福爾馬林或多聚甲醛,4℃、24小時，常規(guī)的石蠟包埋切片可以滿足相當一部分酶的細胞化學要求；電鏡樣品固定通常用0.5～2％戊二醛或4％多聚甲醛,4℃、2小時，再切成5～100μm的厚片用于細胞化學反應，反應后經常規(guī)的鋨酸后固定，脫水、包埋、超薄切片、至電鏡下觀察。冷凍切片能較大限度地保存酶的活性，因此是光、電鏡酶細胞化學技術中常用的方法。

酶細胞化學反應實際上就是孵育反應的過程，孵育液的成分主要有酶的底物、捕捉劑，保證孵育液pH 的緩沖液以及有關的添加劑等。孵育的溫度和時間可根據不同的酶和組織通過實驗而確定。電鏡酶細胞化學的樣品在孵育反應后需經鋨酸后固定、梯度乙醇脫水、環(huán) 氧樹脂包埋和超薄切片，至電鏡下觀察。

基本實驗過程式：