洗滌這是實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程中看似很簡(jiǎn)單但又至關(guān)重要的一個(gè)步驟，所以上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司結(jié)合了技術(shù)人員的建議和指導(dǎo)來(lái)給你們普及一下這方面的知識(shí)。
洗滌方法：
1.自動(dòng)洗板機(jī)：每孔加入洗滌液350ml，注入與吸出間隔60秒。洗板5次。
2.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350ml，浸泡1-2分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。
生物試劑實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫；試劑或樣品配制時(shí)，均需充分混勻，并盡量避免起泡。
3.加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100ml，余孔分別加
標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ml，注意不要有氣泡，加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
4.棄去液體，甩干，每個(gè)孔中加入Detection Ab工作液100ml(在使用前15分鐘內(nèi)配制)，酶標(biāo)板加上覆膜，37℃溫育1小時(shí)。
5.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板 3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350ml/每孔，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。
6.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100ml，加上覆膜，37℃溫育1小時(shí)。
7.棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，方法同步驟3。
8.每孔加底物溶液100ml，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實(shí)際顯況酌情縮短或延長(zhǎng)，但不可超過(guò)30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí)，即可終止)。
9.每孔加終止液50ml，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
10.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開(kāi)酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱
儀器，設(shè)置好檢測(cè)程序。
11.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。
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